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蛋白质电泳技术检验法

信息来源:www.syxrny.com | 发布时间:2020年11月14日

沈阳种子繁育告诉您什么是蛋白质电泳技术,蛋白质电泳技术检验法是指利用电泳技术对备检样品的种子或幼苗的蛋白质进行分离、染色,形成蛋白质电泳谱带的差异,并与标准品种相比较,从而鉴定品种的真实性和纯度的一种方法。不同作物品种,基因不同,基因的直接表达产物——蛋白质在种类、数量、结构等方面亦不同。该法即是利用蛋白质的多态性来反映不同品种DNA组成上的差异,从而进行品种鉴定。该法快速、可靠,不受环境影响。


1.同工酶电泳法同工酶是指来源相同,催化相同反应而结构不同的酶分子类型,具组织、发育和品种间特异性。该法是指利用电泳技术(包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、淀粉胶电泳等)来分离各种酶的同工酶,通过比较同工酶诺,来确定作物种子的纯度。目前,在作物种子纯度鉴定中,常用的、多态性较强的是脂酶和过氧化物酶,所用方法多为聚丙烯酰胺凝胶电泳法。Quillet等(1992)研究了地理起源不同的52个向日葵自交系的8个同工酶系统,表明同时运用8种同工酶系统可鉴定出其中45个基因型,占总基因型的84%。但与其他方法相比,该法还存在着一些不足:①同工酶具组织、发育的特异性:不同组织、不同发育时期,同工酶的数量和组成不同。利用同工酶鉴定种子纯度所用材料多为幼苗,而将种子萌发为幼苗不光费时,还往往因为种子在萌发进程上的不一致而导致检验结果偏差较大;⑦谱带位点与凝胶浓度、提取液配方、电泳程序等有关;②因酶易失活,故技术上有一定难度。

2.种子贮藏蛋白电泳法种子中所含的贮藏蛋白质可分为清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白等。每一类蛋白质的比例因物种而异,但在品种鉴定上多是根据醇溶蛋白(禾谷类)和球蛋白(豆类)的多样性。不同蛋白质所带电荷不同,在电场中泳动的速度也不同,电泳之后,通过染色显示蛋白质条带的数目、位置和颜色深浅,便构成品种的“指纹”特征,可用于品种鉴定。所用电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、淀粉胶电泳及等电聚焦电泳等。E11Zs等(1997)利用淀粉凝胶电泳分析了29个英国小麦品种的醇溶蛋白,除个别外,这些品种都能被区分开。但值得注意的是,对于某些遗传组成非常接近的品种,如保持系和不育系,不易找到特异蛋白,采用蛋白质电泳难以发现特征带。另外,蛋白质电泳图谱易受种子(或幼苗)发育阶段及表达器官的影响,有时不够稳定,影响了图谱分析,从而影响了鉴定结果的准确性。
沈阳种子繁育
目前,国外许多先进种子检验实验室多采用超薄等电聚焦电泳法来进行品种鉴定。该法操作方便、准确性高、制胶速度快。由于凝胶超薄(0.15mm),因而可降低检验成本,且缩短了固定、染色和脱色时间。再加上该法采用水平平板电泳槽,可进行双聚焦,这样就大大增加了点样数量,从而提高了工作效率。